脲酶丨Worthington杰克豆脲酶的

脲酶催化尿素水解：

（NH2）2CO+3H2O→CO2+2NH4OH

Jespersen()报道氨基甲酸铵是在柠檬酸盐和Tris缓冲液中产生的。

脲酶存在于许多细菌、几种酵母和许多高等植物中。Varner()对其进行了审查。两个最好的来源是：杰克豆（Canavliaensiformis），它已经被结晶和彻底研究，以及巴氏杆菌。

该酶在尿素测定中很重要。参见Guilbault和Montalvo()。已报道其固定化：等。()、James和Pring()、Messing()、Nakamoto等人。()、Sundaram()和Tran-Minh和Broun()。

艾美捷Worthington杰克豆脲酶的特性：

分子量：,(Fishbeinetal.)。

组成：单体（a）脲酶可以聚合形成约三百万道尔顿的六个单元聚合物。（Fishbein等人；Fishbein和Nagarajana）。Andrews和Reithel()报告了巯基。Contaxis和Reithel()表明分子可以分成两半而不会失去活性。另见Contaxis和Reithel()、Fishbein和Nagarajan(b)、Lynn()以及Bailey和Boulter()。

最佳pH值：7.4（Cesareo和Langton，）。

Km：Tris·HCl中1.3mM（Cesareo和Langton，）。

抑制剂：重金属。形成NH4+离子。另见Fishbein和Carbone()。钠和钾离子是抑制剂（Cesareo和Langton，）。

特异性：脲酶对尿素和羟基脲具有特异性（Fishbein和Carbone）。另见Sundaram和Laidler()。

稳定剂：浓度为1X10-3M的EDTA。50%甘油溶液可在4°C下保护脲酶结晶悬浮液数月。

艾美捷Worthington脲酶测定方法：

方法：Worthington采用了一种测定方法，其中通过将氨生成与谷氨酸脱氢酶反应偶联来测量尿素的水解。

在指定条件下，在25°C和pH7.6条件下，一个单位会导致每分钟氧化1微摩尔NADH。除了提高灵敏度外，该测定方法还具有可以对其进行操作以允许对尿素进行定量的优点。

试剂：

0.1M磷酸钾缓冲液，pH7.6

磷酸盐缓冲液中的0.MAdenosine-5-diphosphate(ADP)

磷酸盐缓冲液中的0.MNADH

磷酸盐缓冲液中的0.Ma-酮戊二酸

磷酸盐缓冲液中的1.8M尿素

谷氨酸脱氢酶：在50%甘油或磷酸盐缓冲液中稀释至约单位/ml。使用期间冷藏。

酶：

将酶以1mg/ml溶解在0.1M磷酸盐缓冲液中，pH7.6。临用前，在缓冲液中进一步稀释以获得0.02-0.04ΔA/分钟的速率。

程序：

将分光光度计调整到nm和25°C。将移液器移入每个比色皿，如下所示：

0.10M磷酸盐缓冲液，pH7.62.4毫升

0.MADP0.1毫升

0.MNADH0.1毫升

0.Mα-酮戊二酸0.1毫升

1.8M尿素0.1毫升

GLDH(单位/毫升)0.1毫升

在分光光度计中于25°C孵育5-10分钟以达到温度平衡并确定空白率（如果有）。由于试剂中的微量氨，可能会观察到吸光度的轻微变化。在吸光度变化为零后，加入0.1ml适当稀释的酶。记录A减少8-10分钟。从曲线的线性部分确定ΔA/分钟。可能会出现轻微的延迟。

Worthington核心酶：包括：胶原蛋白酶，脱氧核糖核酸酶I，弹性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。