这两个因素结合起来提高了杂交重复实验的可

DNA-RNA杂交所需的甲酰胺浓度为30%-40%(VV),远低于Marmur和Tso发现的使天然DNA(在0.02mol/LNaC1-0.mol/L柠檬酸钠溶液中)变性所需的60%(V/V)。

最近的偶然发现表明：使用甲酰胺水溶液的杂交比升高温度的杂交具有更多的优点。这些优点包括提高了固定化DNA在硝酸纤维素膜上的保留时间，并降低了非特异杂交背景。这两个因素结合起来提高了杂交重复实验的可重复性。

甲酰胺溶液中的杂交在低温下进行，有助于降低因延长温育过程而引发的核酸分子剪切。

除了以上这些优点以外，甲酰胺的存在可以增加针对特定实验设计反应条件的灵活性。通过甲酰胺控制杂交的严谨性比通过调节温度更容易。多种阳离子去污剂可以极大地提高核酸互补链的杂交效率(PontiusandBerg)，包括十二烷基三甲基溴化铵(DTAB)和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB),它们都是季铵盐化合物-四甲基溴化铵的变异体。

CTAB可以用来稳定寡核苷酸探针与靶序列之间形成的双链结构(请参阅第10章)。在毫摩尔级浓度时，DTAB和CTAB可以使两条DNA互补链的复性速率提高倍以上。这种杂交速率的提高是特异的，并且发生率比非互补DNA杂交高倍以上。

多家制造商出售的快速杂交缓冲液可以将杂交反应的时间从16h降低到1~2h。尽管这些溶液的化学成分是商业秘密，但是看来有些含有季铵盐化合物，有些含有10%硫